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「实验指南」配置PBS步骤详解

人阅读 发布时间:2021-01-05 13:56

PBS作为生物实验中最常用的试剂,相信很多小伙伴都配置或者实验使用过。PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline),一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。它具有盐平衡、可调整适宜pH、可以缓冲pH等特点。

PBS、蒸馏水和生理盐水三种溶剂该怎么选择呢?

蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;而生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应。

在实验室也常见PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸钠和磷酸钾。若只是化学反应,用PB溶液就行。在PB的基础上按照一定比例加NaCl,就可配置PBS;将磷酸钠和磷酸钾,NaCl,Tween-20按照一定比例,即可配成PBST溶液。

PBS配置过程

第一步,准备洗干净的瓶子和配置PBS所需的纯水。

第二步,根据所需要的PBS浓度确定各成分需要的量,不同实验室要求不一样,所以成分及用量会有区别。以我们细胞部门为例,我们配置的PBS成分如下:

试剂名称g/LKH2PO40.144NaCl9.0Na2HPO40.421

第三步,将称取的药品加入纯水搅拌至完全溶解。

第四步,将溶液pH调整至7.4左右。这里不同实验对溶液pH要求不一样,细胞部门主要是用于胰酶消化细胞,胰酶在偏碱性环境活性会强一点,所以细胞部门的pH可以稍微偏高一点,一般实验使用的话调整pH 7.2-7.4即可。

第五步,将配好的溶液定容到所需的体积,然后高温高压灭菌或者0.22um滤膜过滤除菌。时间充足的小伙伴可以高温高压灭菌,比较着急用的小伙伴可以直接0.22um滤膜过滤,其实效果是一样的。

第六步,等灭菌的PBS温度降下来或者过滤了就是无菌的PBS了,拧紧瓶盖,封上封口膜,就可以放在4度冰箱备用了。

PBS是我们实验中很常用的试剂,虽然配置比较简单,但也需要用心做好哦,毕竟用心做好每一步是获得一个漂亮的实验结果的前提。

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