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  • 联系人:

    李平

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    湖北 武汉市 洪山区

  • 业务范围:

    ELISA 试剂盒、抗体、试剂、细胞库 / 细胞培养、技术服务

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ELISA试剂盒中的基质效应

人阅读 发布时间:2021-05-27 17:01

2001年6月,美国曾爆出过一个大新闻:因为临床诊断中,hCG 免疫检测试剂盒得到了假阳性结果,使一位名叫Jennifer Rufer的女性被误诊为癌症,因此经历了长期化疗、肺部手术、甚至子宫切除。当事人把医院和诊断试剂公司告上法庭,获得了1620万美元的赔偿,创下当时医疗事故的最高赔偿金额。

痛苦的遭遇,巨额的赔偿,就因一个hCG检测假阳性结果而起,这太坑了!法院把责任判给了诊断试剂公司和医院,但这事的始作俑者其实是一种被称为“基质效应”的免疫检测干扰现象。

在ELISA实验中,偶尔会遇到样品浓度挨近试剂盒的灵敏度就容易发生样本OD450值低于空白值的现象,特别是在血清和血浆样本中。这就有可能是基质效应导致的结果。

什么是基质效应呢?
首先我们要知道什么是基质,基质是指样品中目标分析物以外的部分。由于基质成分会对分析过程有显著干扰,影响分析结果的准确性。业内把这些影响统称为基质效应。这是ELISA试剂盒开发和使用中需要避开的雷。

如何判断是否是基质效应呢?
当单个样本或少量样本值低于空白值时,可能是实验操作出现问题,这时应增加重复,进步操作技术。当许多样本都低于空白值时,应思考基质效应的影响,建立校正曲线予以修改。基质效应的原因错综复杂,有可能是样品中存在的基质导致原抗体的联络结合能力下降,便产生了样本值低于空白值的现象。导致样本值无法计算出数值,或许数值为负。

虽然原因复杂,但有方法可以用来评估基质效应。

第一种方法是采用线性稀释,一般来讲,抗原和捕获抗体、检测抗体之间的结合作用很强,样品浓度被稀释并不影响它们的结合,而造成基质效应的非特异结合的力要弱很多,如果不断稀释样品,非特异结合造成的干扰会逐步减少,测量值也更接近真实值。没有基质效应时,无论如何稀释,测量值都和真实值吻合。而有基质效应时,稀释会造成非特异性结合比例的减少,测量值也相应地产生很大改变。

第二种方法是掺入回收率实验,将低、中和高浓度的分析物掺入到已测定过浓度的样本中,掺入前后实测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率,回收率以百分比的形式呈现。回收率介于80-120%,才符合标准。


那我们如何避免ELISA实验中基质效应?

基质效应可以通过产品研发阶段的优化尽可能去消除的。菲恩生物针对ELISA产品研发进行了多种优化。ELISA试剂盒在开发进程中,标准品不选用人或动物血清、血浆作为标准曲线的稀释液,只能选用其仿照物。我们量身定制的缓冲液系统,这些优化后的缓冲液体系能很好消除基质效应。还有当检测某个分析物时,其他相关因子或类似结构因子如果有非特异性结合,也会导致基质效应,我们也因此做了大量的交叉反应,确保没有明显的交叉反应和干扰。而且我们试剂盒必须通过严格的基质效应测试,全部包括线性稀释和掺入回收率实验,并把测试结果记录在说明书中。详情请咨询菲恩生物。菲恩生物试剂盒组件非常稳定,操作便捷,以下简单介绍菲恩生物试剂盒的特点以及方法分类。



1、双抗体夹心法
试剂盒中提供的微孔板已预先包被抗体。采用生物素偶联抗体作为检测抗体。



2、双抗原夹心法
试剂盒中提供的微孔板已预先包被抗原。采用生物素偶联抗原作为检测抗体。



3、包抗体竞争法
试剂盒中提供的微孔板已预先包被抗体。反应时,样品或标准品中的待测蛋白会与固定量的生物素标记的抗原竞争结合抗体。



4、包抗原夹心法
该试剂盒中提供的微孔板已预先包被抗原。反应时,样品或标准品中的待测抗原会与固定量的生物素标记的抗体竞争结合抗原。



5、间接法(SABC)
试剂盒中提供的微孔板已预先包被抗原。采用生物素偶联抗体作为检测抗体。



6、间接法(HRP)
该试剂盒中提供的微孔板已预先包被抗原。以HRP偶联抗体作为检测抗体。

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