文献解读 | IF=44.5，关于化疗对肿瘤细胞转移具有潜在不利影响的机制，提出了改善癌症治疗的新策略

联合达沙替尼+槲皮素清除衰老细胞，显著减少SASP、NETs及DTC再激活，抑制肺转移，且不影响原发灶疗效。临床样本显示患者化疗后血清SASP与NETs标志物升高，支持机制相关性。

研究团队此前从人乳腺癌细胞系MCF10CA1h中分离出两种肺播散性肿瘤细胞（DTC）亚群：休眠型P2和转移型P1。静脉接种裸鼠后，P1细胞持续增殖并形成转移，而P2细胞在肺内长期保持EdU⁻休眠状态（长达9周），仅偶见少量增殖细胞。令人意外的是，阿霉素化疗虽有效抑制P1的转移，却显著促进P2休眠DTCs重新进入增殖状态，并导致肺部复发频率和严重程度上升。在4TO7原位移植及4T1自发转移模型中，辅助或新辅助化疗同样增强DTC增殖、加速转移，即使重复给药亦不进一步加剧效应，反而诱导已激活DTC凋亡。通过预处理实验发现，化疗并非直接作用于DTC，而是通过改变肺微环境“唤醒”休眠细胞。利用DormTracer示踪与3D成像等方法进一步证实，化疗重塑了肿瘤生态位，间接促进DTC再激活和转移。

化疗后播散性肿瘤细胞（DTCs）增殖增加，可能源于休眠DTCs的重新激活，或原有增殖性DTCs的累积。为明确区分这两种来源，研究团队构建了名为DormTracer的遗传示踪系统：将多西环素诱导的p27K⁻-Cre融合蛋白与LoxP-STOP-LoxP-mCherry报告基因结合。在休眠状态下，p27K⁻入核激活Cre，标记mCherry；而在增殖细胞中，p27被胞质滞留或降解，无法启动重组。结合Ki67染色，该系统可精准区分三类细胞状态：持续增殖（mCherry⁻Ki67⁺）、休眠（mCherry⁺Ki67⁻）和再激活（mCherry⁺Ki67⁺），并追溯转移灶的起源。

体外实验显示，DormTracer在血清剥夺/恢复模型中能动态记录细胞从增殖→休眠→再激活的全过程。体内静脉接种P1/P2细胞后，系统证实P2以休眠为主，P1虽具转移性但仍含大量休眠DTCs。关键的是，在阿霉素预处理小鼠中，随时间推移，P2休眠DTCs显著减少，再激活细胞持续增加，而增殖性DTCs并未扩增；未处理组则无此变化。最终肺转移灶几乎全部源自再激活谱系（mCherry⁺），仅发现1个持续增殖来源的病灶（mCherry⁻），验证了系统特异性。

在4TO7和4T1原位模型中，DormTracer进一步证实：化疗虽抑制原发瘤生长和DTC播散，却显著促进休眠DTCs再激活，并导致其谱系形成转移；对于高转移性的4T1，辅助化疗反而减少了增殖性DTCs来源的转移，却增加了休眠唤醒所致的转移。综上，研究明确揭示：化疗诱导的转移主要由休眠DTCs再激活驱动，而非预存增殖细胞的积累。

为探究化疗如何重塑肺微环境以唤醒休眠肿瘤细胞，研究团队对4T1原位瘤切除后接受或未接受阿霉素辅助治疗的小鼠肺组织进行了单细胞RNA测序（scRNA-seq）。在非免疫细胞（CD45⁻）中鉴定出成纤维细胞、上皮细胞等五类，其中两个上皮亚群经拷贝数变异（CNV）和Arhgdig高表达确认为肿瘤细胞；化疗后，其增殖亚群（高表达Mki67/Pcna）比例显著上升，休眠亚群减少，与DormTracer和EdU结果一致。

在免疫细胞（CD45⁺）中，中性粒细胞变化最显著。尽管总数不变，但化疗促使静息态（Mki67⁺）的中性粒细胞亚群消失，而另一亚群富集并高表达NET标志物Padi4，提示向促炎、促NET状态转化。进一步细分发现，NET形成能力最强的中性粒细胞亚群6在化疗后显著扩增。空间转录组及4TO7模型的scRNA-seq均验证了这一现象。免疫荧光染色进一步证实，无论在荷瘤或无瘤小鼠中，阿霉素均可诱导肺内中性粒细胞发生NETosis（形成Cit-H3⁺/Ly6G⁺结构），表明化疗通过激活中性粒细胞促进NET生成，从而改变微环境、驱动休眠DTCs再激活。

近期研究表明，化疗和免疫治疗可诱导中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）形成，而NETs在促进转移中起关键作用——可通过降解肺内抑瘤蛋白、重塑细胞外基质或抑制免疫监视，激活休眠DTCs。本研究发现，阿霉素预处理后肺内NETosis增强，与DTC再激活高度一致。为验证NETs的作用，在P2细胞接种前使用DNase I（降解NET DNA）或GSK484（抑制PAD4阻断NET形成），虽不影响肿瘤细胞定植，却完全逆转了化疗诱导的DTC再激活和肺转移。同样，在4TO7辅助化疗模型中，GSK484显著抑制休眠DTCs的觉醒。结果表明，NETs是化疗促休眠唤醒的关键介质。