IP实验原理

IP又称免疫沉淀（Immunoprecipitation），是利用抗原和抗体的特异性结合以及“proteinA/G”特异性结合到抗体的FC片段的现象开发出来的方法，简单来说，抗原与抗体类似于锁和钥匙之间的关系，一把钥匙（抗体）只能开一把锁（抗原），而钥匙可以通过钥匙链（细菌蛋白的“proteinA/G”）快速找到。ProteinA/G抗体-目的蛋白复合物从混合液中沉淀下来，最后将靶蛋白从磁珠上洗脱，并通过SDS-PAGE，Western Blot等手段对洗脱下来的蛋白进行分析。

IP是用来富集目的蛋白的，那么在生物体内蛋白一般可能会与什么结合呢？

这个我想大家都知道，那就是DNA、RNA、蛋白质。通过IP的方法富集蛋白，检测与其结合的DNA的方法即为ChIP；通过IP的方法富集蛋白，检测与其结合的RNA的方法即为RIP；通过IP的方法富集蛋白，检测与其结合的蛋白的方法即为coIP。

CoIP又叫免疫共沉淀，利用抗原A与蛋白质B结合，通过A的抗体（钥匙）沉淀A（锁），再利用精制的proteinA（钥匙链）预先结合到磁珠上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，磁珠上的proteinA就能吸附抗体，从而获得抗原A与抗原B的结合体，之后就可以对B检测，获得蛋白质之间的相互作用信息。

RIP又叫RNA免疫沉淀，利用抗原A与RNA B结合，抗原A的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化对RNA进行测序或PCR分析，就可以获得RNA与蛋白相互作用的信息。

 

CHIP又叫染色质免疫共沉淀，利用抗原A与DNA B结合，抗原A的抗体把相应的DNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化对目的DNA片段分析，就可以获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

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