对于经常进行抗体检测工作的人来说，非特异性结合和背景着色常常是一大困扰，某些情况下二抗存在交叉反应是主要原因。

二抗，即第二抗体，是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗的制备一般是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。因此二抗实际上也是多抗，本身的特性决定了其大概率会存在交叉反应。

针对这一问题，我们可以在制备二抗时添加一步预吸附的纯化步骤，以提高抗体的特异性。基本原理是将二抗流经固定有潜在交叉反应的物种的血清蛋白的基质柱，有非特异性结合的二抗会留在柱中，而特异性高的二抗将通过基质柱，如图。

预吸附基本原理示意图

经过预吸附处理的二抗能有效降低非特异性背景，尤其在多重染色实验和样本中内源性免疫球蛋白 (Igs) 含量高的IHC实验时效果更好。

多重染色实验时，由于同时使用多个一抗和对应的二抗，每种二抗有和其他一抗之间交叉反应的风险。例如同时使用兔抗和小鼠抗进行双染实验时，应使用针对小鼠血清预吸附的抗兔二抗，和针对兔血清预吸附的抗小鼠二抗。

而IHC实验中如果所用样本中内源性免疫球蛋白 (Igs) 含量高，二抗也有与样本本身免疫球蛋白交叉反应的风险。如对人组织样本进行染色时，应使用对人血清预吸附的HRP二抗。

下面列举几种菲恩生物预吸附二抗产品及实际应用图例

ES-0003

Poly HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)

https://www.fn-test.com/product/es-0003/

ES-0004

Poly HRP-conjugated Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)

https://www.fn-test.com/product/es-0004/

ES-0003在人结肠癌组织中应用

ES-0004在人乳腺癌组织中应用