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公司新闻/正文
FineTest®菲恩生物细胞业务介绍
2832 人阅读发布时间：2019-05-16 15:25
武汉菲恩生物科技有限公司
细胞及其业务简介
细胞及其业务简介
1、细胞基本特性
1.1、细胞概念
细胞：生物体基本的结构和功能单位。
1.2、细胞形态
1.1、细胞概念
细胞：生物体基本的结构和功能单位。
1.2、细胞形态
1.3、细胞分类
原代细胞：即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。
一般原代细胞均可以传代10代左右，广义上讲，也可以被称为原代细胞。
细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。
细胞系可以传代有限次数（10-60次）的被称为有限细胞系；可以无限传代（高于60次）的称为无限细胞系。
细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的具有一定特性的细胞群，称细胞株。
细胞株没有纯度概念。所谓细胞系，本身就是各种细胞混合，无法准确评估某一种细胞含量；而细胞株是由一个细胞增殖而来，高度均一，相似度近乎100%。
1.4、细胞增殖
细胞增殖：细胞增殖都是一分为二，大部分都是有丝分裂，仅少数为无丝分裂。
2、细胞售前
2.1、培养基
细胞培养基-基础培养基：
相同的细胞在不同的实验室及细胞库所使用的培养基会有所不同。一般情况下，细胞培养基是不建议随意更改的。
仅推荐使用Gibco、HyClone品牌的培养基。
细胞培养基按说明书选择，随意更换培养基即使在售后期内也不予免费售后。如果需要更换培养基，下单前于菲恩生物(FineTest®)业务员沟通备注。
完全培养基：即可以直接用于培养细胞的培养基。
主要构成：基础培养基+血清+双抗
有部分细胞的完全培养基需要添加一些细胞因子（如胰岛素、白介素等）或者其他必须的添加物（如G418、HT等）。
PS：极少数细胞培养基不需要添加其他物质就可以直接培养细胞，这种培养基也称为无血清培养基（ serum free medium, SFM ），是一类专门设计为无血清培养细胞的培养基。
2.2、血清
血清：提供细胞生长必须的营养成份，如激素、生长因子、各种蛋白酶抑制剂等。
主要使用牛血清：胎牛/新生牛/小牛、灭活/未灭活、无支原体/无噬菌体、澳洲/北美/南美/国产。
血清选择：建议四季青13011-8611或者11011-8611，不建议BI血清及培养基，不建议excell（依科赛）或其他国产血清及培养基，其他品牌血清、培养基大部分我们未尝试，慎用。大部分细胞使用的血清不需要灭活，极少数对培养条件比较严格的细胞可以灭活血清后使用（如SF9）。
2.3、细胞图片
原代细胞：即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。
一般原代细胞均可以传代10代左右，广义上讲，也可以被称为原代细胞。
细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。
细胞系可以传代有限次数（10-60次）的被称为有限细胞系；可以无限传代（高于60次）的称为无限细胞系。
细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的具有一定特性的细胞群，称细胞株。
细胞株没有纯度概念。所谓细胞系，本身就是各种细胞混合，无法准确评估某一种细胞含量；而细胞株是由一个细胞增殖而来，高度均一，相似度近乎100%。
1.4、细胞增殖
细胞增殖：细胞增殖都是一分为二，大部分都是有丝分裂，仅少数为无丝分裂。
2、细胞售前
2.1、培养基
细胞培养基-基础培养基：
相同的细胞在不同的实验室及细胞库所使用的培养基会有所不同。一般情况下，细胞培养基是不建议随意更改的。
仅推荐使用Gibco、HyClone品牌的培养基。
细胞培养基按说明书选择，随意更换培养基即使在售后期内也不予免费售后。如果需要更换培养基，下单前于菲恩生物(FineTest®)业务员沟通备注。
| 1640 | Hyclone货号：SH30809.01 | Gibco货号：31800022或者11875093. |
| DMEM | Hyclone货号：SH30022.01 | Gibco货号：12800017或者11995065. |
| EMEM为MEM+NEAA | ATCC货号：30-2003. | Gibco货号：41500034 |
| IMDM | Hyclone货号：SH30228.01 | Gibco货号：12440061 |
| Mccoy’s 5A | SIGMA货号：M4892 | Gibco货号：16600108. |
| L15 | Hyclone货号：SH30048.02 | Gibco货号：41300039 |
主要构成：基础培养基+血清+双抗
有部分细胞的完全培养基需要添加一些细胞因子（如胰岛素、白介素等）或者其他必须的添加物（如G418、HT等）。
PS：极少数细胞培养基不需要添加其他物质就可以直接培养细胞，这种培养基也称为无血清培养基（ serum free medium, SFM ），是一类专门设计为无血清培养细胞的培养基。
2.2、血清
血清：提供细胞生长必须的营养成份，如激素、生长因子、各种蛋白酶抑制剂等。
主要使用牛血清：胎牛/新生牛/小牛、灭活/未灭活、无支原体/无噬菌体、澳洲/北美/南美/国产。
血清选择：建议四季青13011-8611或者11011-8611，不建议BI血清及培养基，不建议excell（依科赛）或其他国产血清及培养基，其他品牌血清、培养基大部分我们未尝试，慎用。大部分细胞使用的血清不需要灭活，极少数对培养条件比较严格的细胞可以灭活血清后使用（如SF9）。
2.3、细胞图片
细胞形态各异，即使同为悬浮或者贴壁细胞，也会有差异。
2.4、细胞形态
相同细胞使用不同培养基、不同培养条件甚至不同时期都会有不同的形态特征，因此在不同实验室、细胞库的细胞形态上都可能会有些差异。
有些细胞本身也是存在多种形态的，并不说明细胞不纯。
3、细胞培养
3.1、复苏步骤
3.2、细胞培养
3.2.1、不同细胞的生长速度会有明显区别，但大部分细胞株都是3-5天的传代时间，仅少部分细胞生长速度略慢。
3.2.2、细胞培养过程中细胞呈现低密度-低生长速度、高密度-高生长速度的趋势。
3.2.3、不同细胞生长开始凋亡的细胞密度不一致。
3.3、细胞传代
3.3.1、贴壁细胞消化的好坏直接影响到细胞活性，若传代后细胞死亡或者碎片比较多，大部分情况下是因为消化不当导致的。
3.3.2、不同细胞贴壁程度不同，需要的消化时间不同；不同胰酶活性不同，也会影响细胞消化时间。
3.3.3、传代比例以细胞密度及生长速度为准，从1:2到1:6均可
3.4、细胞冻存
细胞冻存：将细胞收集后，由冻存液重悬并将之降温至冰点以下的过程。
3.4.1、收集细胞过程中需要轻柔，防止冻存前细胞死亡。
3.4.2、冻存液配制：92%FBS+8%DMSO。
3.4.3、冻存过程降温速度需要严格控制，尤其是冰点附近。
3.4.4、细胞冻存的具体方式在各个实验室都不一致，不同冻存方式对应的最佳复苏方式也会不一致，具体冻存方式以各实验室流程规范为准。
4、细胞发货
4.1、细胞数量细胞数量：每次发货细胞数量约为1-2x106个。
4.1.1、相同细胞每次发货可能会有数量偏差，但总体在一个数量级。
4.1.2、不同发货形式也会有差异，T25整体数量会明显偏高，可能会达到5x106，离心管其次，血清及冻存管约1-2x106。
4.1.3、除部分生长特别迅速的细胞外，大部分细胞在运输过程中，由于温度过低，生长会明显处于停滞状态，细胞数量不会有明显增长。
4.1.4、在运输过程中，部分细胞可能会死亡、破碎，导致客户实际收到的细胞可能会偏少。
4.2、发货形式
发货形式：T25、离心管、血清及冻存。
| 外包装 | 细胞状态 | 内容物 | 适宜气温 | |
| T25 | T25瓶 | 贴壁 | 完全培养基 | ＞10℃ |
| 离心管 | 15ml离心管 | 悬浮 | 完全培养基 | ＞10℃ |
| 血清管 | 1.5ml冻存管 | 贴壁&悬浮 | 血清 | 0-20℃ |
| 冻存管 | 1.2ml冻存管 | 贴壁&悬浮 | 冻存液 | ＜0℃ |
发货时间：一般一周之内，但是不同细胞冻存、复苏、生长速度及订单数量都会影响其实际发货时间。
4.3.1、复苏的细胞发货时间定为每周的周一、二、三、六，主要是因为此时发货不会到周末到货，客户不用周末加班。
4.3.2、干冰发货的细胞发货时间定为每周的周一、三、五，主要是依据干冰送货时间确定。
4.3.3、发货时间不能保证准确到某一天，可能会相差一个发货日；预测发货时间越长，误差越大。
4.4、收货处理
4.4.1、T25：收货→观察细胞状态→酒精消毒→37度平衡2h→取培养基备用→传代或者继续培养。
4.4.2、血清：收货→酒精消毒→37度平衡2h→接种到完全培养基→ 观察细胞状态→继续培养。
4.4.3、离心管：收货→酒精消毒→37度平衡2h →离心收集细胞→新培养基重悬→接种观察细胞状态→继续培养。
4.4.4、干冰：收货→放液氮或-80冰箱→复苏→观察细胞状态→继续培养。
5、细胞售后
5.1、细胞状态
形态：不同细胞形态不一，有些有触角，有些有黑点，有些细胞分布不均，也有些分不清单个细胞，这些属于该细胞基本特性。运输可能会导致细胞形态或者状态产生变化，一般平衡后即会好转，培养1-2天会趋于正常。
碎片：部分细胞在培养过程中会不断死亡或者有部分漂浮。运输可能会导致细胞死亡，尤其是贴壁不牢或者悬浮的细胞，产生很多细小的细胞碎片，一般经过处理后，细胞不会受到太大影响。
生长：不同细胞生长速度不一致，同一细胞使用不同培养基也会出现生长不一致的情况。细胞经过长途低温运输后，其生长速度会明显减缓，大部分细胞平衡后可恢复，但部分生长缓慢的细胞可能会持续1-2天。
5.2、细胞污染
细胞在运输过程中可能会有部分细胞破碎，产生较多细小的碎片，且会随着培养或者传代，碎片增多，很像细胞污染，但其实只是没有合理处理细胞导致细胞一直在死亡。
| 支原体污染 | 细菌污染 | 霉菌污染 | |
| 肉眼 | 不可见 | 培养基浑浊、变黄 | 球形或分支形菌丝 |
| 光镜 | 不可见 | 底面有厚厚的细菌 | 明显的霉菌菌丝 |
| 时间 | 不明 | 24h | 1-2天 |
| 检测 | PCR、荧光、培养法 | LB培养基培养 | 不需检测 |
| 处理 | 可用药物清除 | 处理后丢弃 | 处理后丢弃 |
5.3、细胞表型
细胞在长期的快速分裂生长过程中，可能会产生突变，导致某些细胞性状发生改变。
有些细胞的标志物不是细胞本底表达，而是需要诱导后才能够检测到。
客户所使用的检测方法或者检测条件需完全按照文献资料，否者检测结果不具有可参考性。
5.4、细胞鉴定
细胞STR鉴定应用于生物医学研究领域的哺乳动物细胞被错误鉴定和交叉污染的问题，这一直是一个普遍存在的突出问题。据统计，国外实验室有20%左右的细胞株被错误鉴定和交叉污染。
因此，对于鉴定方面的问题，我们仅可提供引种重发、提供其他细胞或者退还细胞款的售后，不支持其他申请。
5.5、售后规定
由于客户不按要求进行细胞操作、使用培养基或者客户传代后细胞污染、生长缓慢甚至死亡等原因导致售后，不予免费售后。
自客户收到细胞当日起，一周之内细胞出现问题（不包含客户自身原因导致的），提供明确的细胞状态图片及培养方式，经技术确认后可以免费重发。
5.5.1、一周至三个月之间：细胞出现问题，重发收取复苏培养及包装运输费用。
5.5.2、一个月至六个月之间：细胞出现问题，重发收取细胞购买费用的半价。
5.5.3、六个月以后：细胞出现任何问题，不再提供技术支持或者售后。
更多培养细胞技术方面问题请咨询菲恩生物(FineTest®)王先生：QQ：3495998903；E-mail：3495998903@qq.com