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接收细胞后的操作流程
4509 人阅读发布时间：2019-05-13 14:11
接收细胞后的操作流程
1、复苏步骤
将所需的完全培养基放在培养室室温预热30min后开始复苏。复苏步骤：先准备37度温水，将细胞从液氮罐取出，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖，将细胞冻存部分浸入温水轻轻摇晃，一分钟左右细胞将会融化。融化完全后立即终止水浴，直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力100g(约900rpm)左右，1min为宜，不同离心机会有差异。离心完成后，弃冻存液，用刚才预热的培养基缓慢加入冻存管，并轻柔重悬细胞后接种至T25或者10cm皿中。显微镜下观察细胞并拍照留存，第二天再观察细胞。要求整个复苏过程时长不超过5min，吹打细胞尽量轻柔，且不能有大量气泡。
2、细胞培养
1.不同细胞的生长速度会有明显区别，但大部分细胞株都是3-5天的传代时间，仅少部分细胞生长速度略慢。
2.细胞培养过程中细胞呈现低密度-低生长速度、高密度-高生长速度的趋势。
3.不同细胞生长开始凋亡的细胞密度不一致。
3、细胞传代
1.吸走培养基：去除旧培养基，不要重复使用。
2.PBS冲洗细胞：洗干净残留血清，防止干扰胰酶消化。
3.加入胰酶浸润细胞：足够浸润细胞面即可，不需过多，只需均匀浸没。
4.37度培养箱消化：胰酶最佳活性温度，温度过低会导致胰酶活性降低，过高会导致活性降低或者失活。
5.终止消化：用含血清完全培养基终止，血清可以终止胰酶。
6.离心、接种：用含血清完全培养基终止，血清可以终止胰酶。
7.贴壁细胞消化的好坏直接影响到细胞活性，若传代后细胞死亡或者碎片比较多，大部分情况下是因为消化不当导致的。
8.不同细胞贴壁程度不同，需要的消化时间不同；不同胰酶活性不同，也会影响细胞消化时间。
9.传代比例以细胞密度及生长速度为准，从1:2到1:6均可。
4、细胞冻存：将细胞收集后，由冻存液重悬并将之降温至冰点以下的过程。
1.收集细胞过程中需要轻柔，防止冻存前细胞死亡。
2.冻存液配制：92%FBS+8%DMSO（可根据自身实验室更换）。
3.冻存过程降温速度需要严格控制，尤其是冰点附近。
4.细胞冻存的具体方式在各个实验室都不一致，不同冻存方式对应的最佳复苏方式也会不一致，具体冻存方式以各实验室流程规范为准。
3.冻存过程降温速度需要严格控制，尤其是冰点附近。
4.细胞冻存的具体方式在各个实验室都不一致，不同冻存方式对应的最佳复苏方式也会不一致，具体冻存方式以各实验室流程规范为准。
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FineTest® 承诺：每一株细胞出厂前都经过严格处理及检查，保证细胞免于细菌、真菌、支原体感染，保证成活率。
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